В основе иммунодефицита при ВИЧ-инфекции лежит прогрессирующее снижение количества СD4+ T-лимфоцитов, что является результатом их постоянного разрушения и недостаточного пополнения их количества из клеток-предшественников. Среднее время полужизни вируса и инфицированных клеток в циркуляции составляет менее 2 суток. Ежедневно из инфицированных клеток высвобождаются 109 – 1010 вирусных частиц и сходное число новых клеток подвергаются инфицированию ВИЧ и погибают. Утрачивается способность цитотоксических Т-клеток к ВИЧ-специфичному ответу. При этом возрастает число активированных и ареактивных Т-клеток CD8+, повышается содержание b-2-микроглобулина и неоптерина в сыворотке, происходит поликлональная В-клеточная активация, возрастает образование аутоантител и иммунных комплексов.
РАЗВИТИЕ ВИЧ-ИНФЕКЦИИ БЕЗ АНТИРЕТРОВИРУСНОЙ ТЕРАПИИ (АРТ)
Развитие нелеченной ВИЧ-инфекции делится на следующие стадии: 1. Заражение вирусом ==> 2. (через 2-3 нед.) острый ретровирусный синдром ==> 3. (через 2-3 нед.) восстановление + сероконверсия ==> 4. бессимптомная хроническая ВИЧ-инфекция (в среднем 8 лет) ==> 5. симптоматическая ВИЧ-инфекция/СПИД (в среднем 1,3 г.) ==> 6. смерть. Острый ретровирусный синдром сопровождается резким падением количества клеток CD4, высокой плазменной виремией (что отражается высокой концентрацией РНК ВИЧ в плазме крови). Клиническое восстановление сопровождается снижением уровня плазменной виремии, вследствие развития цитотоксической реакции T-клеток (CTL). Количество клеток CD4 падает из-за вызванной ВИЧ гибели клеток.
Снижение числа CD4 клеток сопряжено с ростом ВН в крови. Концентрации РНК ВИЧ в плазме крови первоначально взрывообразно возрастают в остром периоде инфекции и затем снижаются до определенного стабильного показателя в результате сероконверсии и развития иммунного ответа. По мере прогрессирования инфекции уровень РНК ВИЧ постепенно растет. Поздняя стадия заболевания характеризуется количеством CD4 <200 кл/мм3 и развитием оппортунистических инфекций, некоторых опухолей, дистрофией и неврологическими осложнениями. Среднее время жизни нелеченного пациента после падения уровня CD4 ниже 200 кл/мм3 - 3,7 лет; средний показатель CD4 при наступлении первого СПИД-определяющего (СПИД-индикаторного) осложнения, составляет 60-70 кл/мм3; среднее время жизни после появления первого СПИД-определяющего осложнения - 1,3 года.
ДИАГНОСТИКА ВИЧ-ИНФЕКЦИИ
Диагностика ВИЧ-инфекции включает 2 этапа: установление собственно факта зараженности ВИЧ и определение стадии заболевания.
У 90-95% инфицированных антитела к ВИЧ появляются в течение 3 мес. после заражения, у 5-9% – через 6 мес. и у 0.5-1% – в более поздние сроки. Наиболее ранний срок обнаружения антител – 2 нед. от момента заражения.
Обнаружение антител в принципе может выявить более 99% инфицированных ВИЧ людей. Некоторые сложности связаны с тем, что антитела к ВИЧ отсутствуют в первые недели после заражения, а в терминальной стадии заболевания их количество может заметно уменьшаться.
Чаще всего антитела к ВИЧ обнаруживают иммуноферментными методами. Диагностическими тест-системами называют специальные наборы реактивов для обнаружения маркеров ВИЧ-инфекции. Принципиальных различий в многочисленных коммерческих тест-системах для твердофазного ИФА нет, хотя по чувствительности и специфичности они могут существенным образам различаться. Довольно часто случается так, что одни и те же сыворотки дают разные результаты при использовании разных тест-систем. В связи с этим признано, что положительный результат исследования в одной тест-системе нельзя считать безусловно положительным результатом.
Предложен и используется ряд методов для проверки специфичности результатов обнаружения антител. Среди этих методов наиболее часто применяют реакцию иммунного блотинга. Суть метода иммунного блотинга заключается в том, что иммуноферментную реакцию проводят не со смесью антигенов, а с антигенами ВИЧ, предварительно распределенными методом иммунофореза по фракциям, располагающимся в соответствии с молекулярной массой по поверхности нитроцеллюлозной мембраны. В результате основные белки ВИЧ распределяются по поверхности в виде отдельных полос, которые и проявляются при проведении иммуноферментной реакции.
Обнаружение антител к ВИЧ включает 2 этапа. На первом этапе проводится выявление суммарного спектра антител к антигенам ВИЧ с использованием различных тестов, обычно – иммуноферментного. На втором этапе методом иммунного блотинга проводится определение антител к отдельным белкам вируса.
С целью диагностики используются также методы обнаружения вируса, его антигенов или генного материала (специфических нуклеотидных последовательностей).
Среди антигенов ВИЧ чаще всего пытаются обнаруживать белок р24 ВИЧ-1, однако эта методика не получила широкого применения в эпидемиологических исследованиях, так как большая часть антигена не связана антителами только в начальном периоде заболевания и в периоде развития клинически выраженного иммунодефицита. В связи с этим метод представляет интерес для выявления больных на ранних стадиях ВИЧ-инфекции и иногда для оценки прогрессирования заболевания. Обнаружение этого антигена у ребенка, рожденного от ВИЧ-инфицированной матери, может служить критерием при установлении у него диагноза ВИЧ-инфекции.
Выделение и идентификация культуры ВИЧ являются достоверным признаком инфицирования ВИЧ, однако этот метод малодоступен, требует длительного времени, высокой квалификации исполнителей и специального оборудования.
Наконец, метод обнаружения генного материала ВИЧ методами репликации (амплификации, размножения) специфических генных последовательностей, часто объединяемых под названием одного из вариантов этого метода – «полимеразная цепная реакция». Преимущество ПЦР состоит в том, что она способна выявлять ВИЧ-инфекцию в инкубационном и раннем клиническом периодах, когда антител еще может не быть. Реакции типа ПЦР также успешно используются для прогнозирования течения заболевания и оценки эффективности терапии, определения количественных показателей присутствия ВИЧ в биологических жидкостях.